, 多发性骨髓瘤是一种恶性浆细胞病，多发于中老年人群，以肾功能不全、骨痛、贫血为主要临床表现[1]。多发性骨髓瘤发病较为缓慢，一般早期无明显症状，被误诊的可能性较大[2]。神经钙黏素(N-Cadherin)是一种细胞黏附分子，通过骨髓基质细胞和造血干细胞之间同型分子的黏附作用，参与维持造血干细胞自我更新潜能和干细胞特性，有文献报道其在血液系统肿瘤和上皮癌中表达异常，但临床关于其与多发性骨髓瘤的相关研究鲜有报道[3-5]。可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1) 在非造血和造血干细胞中广泛分布，研究显示，sICAM-1在多发性骨髓瘤患者的血清中处于高表达[6]。血管内皮生长因子(VEGF)是一种特异性生长因子，参与血管的生成，是判断很多恶性肿瘤疗效、预后的参考指标。本研究通过检测多发性骨髓瘤患者及其不同临床分期时N-Cadherin、sICAM-1和VEGF的表达水平，分析其在多发性骨髓瘤患者发生及发展过程中的临床意义。
对象与方法 一、 研究对象选取我院2015年7月至2016年11月收治的70例多发性骨髓瘤患者作为观察组，其中男40例、女30例，年龄(60.22±6.78) 岁。复发患者30例，初诊患者40例。Durie-Salmon分期体系分期：Ⅰ期4例，Ⅱ期19例，Ⅲ期47例。选取同期在我院进行健康检查的70名志愿者作为对照组，其中男41例、女29例，年龄(60.52±6.62) 岁。2组性别、年龄具可比性(P均＞0.05)。
二、 方法 1. N-Cadherin表达检测采集所有研究对象1 ml骨髓注入肝素抗凝管中，在流式试管中加入50 μl骨髓，并向试管中加入单克隆抗体，常温避光保存20 min后，向试管中加入红细胞裂解液1 ml，室温保存10 min，离心处理后将上清液舍弃，在试管中加入1.5 ml生理盐水，再次进行离心处理后将上清液舍去，应用美国Beckman Coulter生产的Epics XL型流式细胞仪获取100 000个细胞，采用CD45/SSC和CD38/SSC设门法直接检测，所用抗体均来自美国Beckman Coulter公司，包括:抗CD325-PE、抗CD45-ECD、抗CD38-PC5、抗CD138-FITC。计算N-Cadherin(CD325) 阳性细胞在CD38+/CD138+细胞中的比例。
2. sICAM-1和VEGF表达检测采集所有研究对象5 ml空腹静脉血，以3 500 r/min的速度离心15 min，取血清并放置在零下80℃的环境中保存，采用ELISA测定sICAM-1和VEGF，试剂盒由美国晶美生物公司生产，严格按照试剂盒使用说明操作。
三、 观察指标比较2组N-Cadherin、sICAM-1和VEGF表达水平，以及不同临床分期患者N-Cadherin、sICAM-1和VEGF表达水平。
四、 统计学处理用SPSS 18.0软件进行数据处理，计量资料符合正态分布以x±s表示，不符合正态分布以中位数(四分位数间距)表示。2组间比较(若符合正态分布)采用独立样本t检验，否则用Wilcoxon秩和检验。多组间若满足正态和方差齐性，比较采用方差分析，进一步两两比较采用LSD-t法；否则用秩和检验(Kruskal-Wallis检验法)。P＜0.05(双侧)为差异具有统计学意义。
结果 一、 观察组与对照组N-Cadherin、sICAM-1及VEGF表达水平的分析观察组血清N-Cadherin、sICAM-1及VEGF表达水平均高于对照组(P均＜0.001)，见表 1。观察组中12例(11.5%)高表达N-cadherin。
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表 1 观察组与对照组血清N-Cadherin、sICAM-1和VEGF表达水平比较 |
不同临床分期患者N-Cadherin表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)；不同临床分期患者sICAM-1表达水平比较差异具有统计学意义(P < 0.001)，两两比较，差异也具有统计学意义(P均＜0.05)；不同国际分期系统(ISS)分期患者的VEGF表达水平比较差异具有统计学意义(P < 0.001)，两两比较，差异也具有统计学意义(P均＜0.05)。越高表达的sICAM-1和VEGF，预示越严重的多发性骨髓瘤分期。见表 2。
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表 2 不同临床分期多发性骨髓瘤患者血清N-Cadherin、sICAM-1、VEGF表达水平比较 |
多发性骨髓瘤是以浆细胞在骨髓内恶性增殖并伴随单克隆抗体产生为特征的克隆性血液病，在血液恶性肿瘤中约占10%，患者伴有肾功能损害、高钙血症以及多发性溶骨性损害，严重影响患者的生活质量。多发性骨髓瘤不同个体之间治疗反应和临床特征均存在一定的差异，是一种异质性明显的疾病，可能与蛋白水平与骨髓瘤细胞分子差异性相关[7]。骨髓微环境不仅能够维持正常造血干细胞的自我更新，而且也是维持骨髓瘤细胞生存的重要场所，骨髓微环境的异常、细胞内信号通路传导的异常等，在多发性骨髓瘤的发病过程中起了重要的作用。
N-Cadherin是钙黏附分子家族的一员，由其介导的细胞与细胞间的黏附对细胞行为起着重要调节作用。最近研究表明，N-Cadherin在前列腺癌、乳腺癌等多种实体肿瘤中表达水平上调，并与肿瘤的病理分级及高侵袭性有关[8-9]。Groen等[10]认为N-Cadherin介导骨髓瘤细胞与成骨细胞的相互黏附，抑制成骨细胞的分化，导致骨质疏松，并参与骨髓瘤细胞的迁移、黏附及定居。本研究结果显示，与健康检查者相比，多发性骨髓瘤患者骨髓中N-Cadherin阳性细胞比例明显升高，这与文献报道的实体肿瘤中N-Cadherin表达水平上升一致[8-9]。同时本研究显示12例(11.5%)患者高表达N-Cadherin，与文献报道的流式细胞术测得6/15患者骨髓瘤细胞N-Cadherin异常表达率不一致，可能与不同的标本数量有关[11]。我们还发现不同临床分期患者N-Cadherin表达水平无明显差异，这与实体肿瘤的相关研究结果不一致[8-9]。支蕾等[12]认为N-Cadherin在维持白血病干细胞自我更新和抗药性的特征中起重要作用。关于N-Cadherin在白血病及多发性骨髓瘤等血液系统恶性疾病中的表达及临床意义的研究相对较少，仍需进行大样本的研究。
sICAM-1属于Ig家族(IGSF)成员，存在于细胞表面，介导细胞与细胞间或细胞与基质间相互接触和结合[13]。近年来研究显示，sICAM-1表达升高时可以选择性促进肿瘤转移过程中与浸润组织的黏附，使其定植在远隔器官，形成转移[14]。多种恶性血液病如淋巴瘤、急性髓细胞白血病等患者血清sICAM-1水平显著升高，并与疾病分期、分型及预后相关[15-16]。本研究结果显示，不同临床分期患者间sICAM-1表达水平具有明显差异，且越严重的临床分期，sICAM-1的表达水平越高，这与文献研究结果是一致的[16]。
VEGF是一种对血管内皮细胞具有特异性的肝素结合生长因子，其可诱导血管新生。VEGF可以作为多种肿瘤的疗效和预后判定指标[17]。有学者认为多发性骨髓瘤患者的VEGF升高导致了微血管再生能力的增强，为多发性骨髓瘤的疾病发展提供了条件，因此不同分期患者的VEGF水平有所不同[18]。本研究结果显示不同临床分期患者间VEGF表达水平具有明显差异，且越严重的临床分期，VEGF的表达水平也越高，这与李欣等[18]研究结果一致。
综上所述，N-Cadherin在多发性骨髓瘤患者中呈高表达，但与病程无明显相关性，仍需收集大样本作进一步研究；检测血清sICAM-1及VEGF水平对于判断多发性骨髓瘤的发生及疾病进展有重要意义。
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